Gen rezistence na karbapenemy (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
Název produktu
Detekční souprava HWTS-OT045 pro gen rezistence na karbapenemy (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) (fluorescenční PCR)
Epidemiologie
Karbapenemová antibiotika jsou atypická β-laktamová antibiotika s nejširším antibakteriálním spektrem a nejsilnější antibakteriální aktivitou. Díky své stabilitě vůči β-laktamázám a nízké toxicitě se stala jedním z nejdůležitějších antibakteriálních léčiv pro léčbu závažných bakteriálních infekcí. Karbapenemy jsou vysoce stabilní vůči plazmidem zprostředkovaným β-laktamázám s širokým spektrem (ESBL), chromozomům a plazmidem zprostředkovaným cefalosporinázám (enzymy AmpC).
Kanál
| PCR-Mix 1 | PCR-Mix 2 | |
| FAM | IMP | VIM |
| VIC/HEX | Vnitřní kontrola | Vnitřní kontrola |
| 5. ročník | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
Technické parametry
| Skladování | ≤-18℃ |
| Trvanlivost | 12 měsíců |
| Typ vzorku | Sputum, čisté kolonie, rektální stěr |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5,0 % |
| Úroveň hádanky | 103CFU/ml |
| Specifičnost | a) Souprava detekuje standardizované negativní reference společnosti a výsledky splňují požadavky odpovídajících referencí. b) Výsledky testu zkřížené reaktivity ukazují, že tato souprava nevykazuje žádnou zkříženou reakci s jinými respiračními patogeny, jako jsou Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, respirační adenovirus, Enterococcus, ani se vzorky obsahujícími jiné geny rezistentní na léky CTX, mecA, SME, SHV, TEM atd. c) Proti interferenčnímu testu byly vybrány mucin, minocyklin, gentamicin, klindamycin, imipenem, cefoperazon, meropenem, ciprofloxacin hydrochlorid, levofloxacin, kyselina klavulanová a roxithromycin a výsledky ukazují, že výše uvedené interferující látky nevykazují žádnou interferující reakci na detekci genů rezistence na karbapenemy KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM a IMP. |
| Použitelné nástroje | Systémy Applied Biosystems 7500 pro PCR v reálném čase Systémy QuantStudio®5 pro PCR v reálném čase Systémy SLAN-96P pro PCR v reálném čase (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) Systém pro real-time PCR LightCycler®480 Systém detekce PCR v reálném čase LineGene 9600 Plus (FQD-96A，Chang-čouBioer technologie) Termocykler MA-6000 v reálném čase (Suzhou Molarray Co., Ltd.) Systém pro real-time PCR BioRad CFX96 Systém BioRad CFX Opus 96 pro real-time PCR |
Pracovní postup
Možnost 1.
Doporučené extrakční činidlo: Macro & Micro-Test General DNA/RNA Kit (HWTS-3019-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (který lze použít s automatickým extraktorem nukleových kyselin Macro & Micro-Test (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) od společnosti Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. Do sraženiny stélky přidejte 200 μl fyziologického roztoku. Další kroky by měly dodržovat pokyny pro extrakci a doporučený eluční objem je100 μl.
Možnost 2.
Doporučené extrakční činidlo: Nucleic Acid Extraction or Purification Reagent (YDP302) od společnosti Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. Extrakce by měla být zahájena v přísném souladu s krokem 2 návodu k použití (přidejte 200 μl pufru GA k precipitátu stélky a třepejte, dokud se stélka zcela nesuspenduje). Pro eluci použijte vodu bez RNázy/DNázy a doporučený eluční objem je 100 μl.
Možnost 3.
Doporučené extrakční činidlo: Macro & Micro-Test Sample Release Reagent. Vzorek sputa je třeba promýt přidáním 1 ml fyziologického roztoku k výše uvedené ošetřené sraženině tallu, centrifugovat při 13000 ot./min po dobu 5 minut a supernatant zlikvidovat (ponechat 10–20 µl supernatantu). Pro čisté kolonie a rektální výtěr přidejte 50 µl činidla pro uvolňování vzorku přímo k výše uvedené ošetřené sraženině tallu a následné kroky by měly být extrahovány podle návodu k použití.
